a) Introducimos un hojita pequeña de tomate.
b) Añadimos 250 ml de tampón (Tris 100ml, regula el PH, EDTA 50ml, coge iones y así el ADN polimerasa trabaja y NaCl 500nM que va a eliminar todo aquello de lo que no precisamos y que es perjudicial.
c) Una vez triturado se le añade 250ul de tampón de extracción.
d) Añadimos 35ul de SDS, que es un detergente que se utiliza para atravesar la membrana plasmática que es lipídica.
e) Se incuba a 65ºC durante 5 minutos.
f) Se le añade 130 ul de acetato de potasio 5M porque precipitan las proteínas ara dar protaminas o histonas.
g) Se deja enfriar durante 5 minutos.
h) Se centrifugan los tubos a 13000 rmp que lo que hará es dejar la parte verdosa al final del tubo, qu eno la queremos y el ADN transparente se quedará arriba y se pasa a un tubito limpio.
i) Se añaden 500ul de isopropanol y 60ul de acetato de sodio 3M y se vuelve a incubar a temperatura ambiente.
j) Se vuelven a centrifugar los tubos para que precipite el ADN y así se elimine la mayor cantidad posible de sobrenadante.
k) Se añaden 300ul de etanol al 70% y se golpea un poco para que se desprenda del fondo.
l) Se vuelve centrifugar y así se elimina la mayor cantidad de alcohol posible.
m) Una vez que este seco se le añade una pequeña cantidad de agua estéril.
Por último, se conserva en la nevera durante 4 meses.
Aquí os dejo algunas fotos realizadas durante el experimento.
